1、考点加强课7 微生物的筛选、鉴定、分离与计数(时间：20分钟满分：100分)1.有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题。(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种到以_为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于_培养基。(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即_和_。(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈越大说明该菌株的降解能力越_。(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和_。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_附近进行，以避免周围环
2、境中微生物的污染。解析(1)本实验的目的是筛选出可以分解原油的高效菌株，从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株，使用的培养基应是以原油为唯一碳源的选择培养基。(2)菌种纯化培养时，常采用平板划线法和稀释涂布平板法接种。(3)当固体培养基上长出单菌落后，可通过比较菌落周围分解圈的大小，来判断菌株降解原油能力的大小。一般来说，分解圈越大说明该菌株的降解能力越强，反之则越弱。(4)灭菌的方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。答案(1)原油选择(2)平板划线法稀释涂布平板法(3)强(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰2.(2016湖南衡阳模拟)回答有关微生物的培养与应用问题：(1)微生物的培养需要
3、使用培养基，不同培养基的配方不同，但一般都有_碳源、氮源；在配制从土壤中筛选纤维素分解菌的培养基时，需加入_作为唯一的碳源，该培养基属于_培养基；若将样品接种到鉴别纤维素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料是_，当形成菌落以后可以根据菌落周围是否产生_来筛选纤维素分解菌。(2)若要统计土壤样品中纤维素分解菌的数目，宜采用_法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的_就能大约推测出样品中的活菌数。(3)一同学在稀释倍数为104的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，则每毫升样品中的活菌数是(所用稀释液的体积为0.2 mL)_。答案(1)水、无机盐纤维素选择刚
4、果红透明圈(2)稀释涂布平板菌落数目(3)1.171063.实现生态农业，让秸秆回归农田的关键是获得能够高效分解秸秆的微生物。请回答下列相关问题：(1)秸秆的主要成分易被_酶分解；从功能上看，筛选能产生该酶的微生物所用的培养基属于_培养基。(2)甲、乙两组同学设计了两种培养基(成分见下表)：培养基硝酸铵无机盐淀粉纤维素粉琼脂CR溶液水AB注：“”表示有；“”表示无；CR为刚果红。A培养基_(填“能”或“不能”)用于分离要筛选的分解菌，原因是_；加入刚果红(CR)的目的是：_。(3)甲、乙两组同学分别采用稀释涂布平板法和平板划线法接种。甲组同学将1 mL水样稀释100倍后，在3个平板上分别接入0
5、.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别是39、38和37，据此可得出每升水样中的活菌数为_个；示意图a和b中，_是甲组同学接种培养后得到的结果；乙组同学划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是_。(4)甲、乙两组同学在微生物接种培养过程中，均留下一个未接种的平板同时培养，目的是_。解析(1)秸秆的主要成分是纤维素，易被纤维素酶分解；筛选能产生纤维素酶的微生物的培养基属于选择培养基。(2)从表中培养基的成分来看，A培养基能用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是该培养基是固体培养基，且以纤维素粉为唯一碳源，利用刚果红来鉴定纤维素的分解情况。刚果红可与纤维素形成红色复合物，
6、当纤维素被分解后.无法形成红色复合物，培养基上会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可据此来筛选纤维素分解菌。(3)从示意图看，图b是采用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。根据题意得知每升水样中的活菌数为380.11001033.8107(个)。图a是采用平板划线法接种培养后得到的结果，划线时总是从上一次划线的末端开始，这样做的目的是通过划线次数的增加，使每次划线时菌体的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。(4)为了确定培养基的灭菌是否彻底，应设置空白对照：随机取若干灭菌后的空平板培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成。答案(1)纤维素选择(2)能纤维素粉是唯一碳源CR可与纤维素形成红色复合物，
7、当纤维素被纤维素酶分解后，培养基上会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈(合理即可)(3)3.8107图b将聚集的菌体逐步稀释，以便获得单个菌落(4)作为对照4.(2016山东济宁检测)高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉嗜热菌样品中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如下图所示：(1)进行过程的目的是_，过程所使用的接种方法是_法。(2)从用途上来说，号培养基属于_培养基，配制时仅以_作为唯一碳源；从物理状态上来说，号培养基属于固体培养基，配制时应加入_作为凝固剂。(3)、号培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是_。一般对配制的培养基采用_法灭菌。(4)培养一
8、段时间后，应从号培养基上挑出_的菌落，接种到号培养基上。解析(1)分析题图可知，过程是梯度稀释，目的是对样品进行稀释；过程是用稀释涂布平板法进行接种。(2)本题实验的目的是筛选高效产生耐高温淀粉酶的嗜热菌，从用途上来说，号培养基属于选择培养基，本培养基以淀粉为唯一碳源；从物理状态上来说，号培养基属于固体培养基，配制时应加入琼脂作为凝固剂。(3)培养基配制和灭菌时应先调节pH，然后再进行灭菌，如果先灭菌再凋节pH，在调节pH时会污染培养基；一般对配制的培养基采用高压蒸汽灭菌法灭菌。(4)能分解淀粉的嗜热菌在号培养基上生长时可释放淀粉酶，分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈，透明圈越大淀粉酶的
9、活性越强，所以要从号培养基上挑出透明圈大的菌落，接种到号培养基上。答案(1)稀释稀释涂布平板(2)选择淀粉琼脂(3)先调节pH，后灭菌高压蒸汽灭菌(4)透明圈大5.如表所示甲、乙分别是分离两种土壤中微生物的培养基的配方，图丙所示为相关分离过程，回答下列问题：KH2PO41.4 g纤维素粉5.0 gNa2HPO42.1 gNaNO31.0 gMgSO47H2O0.2 gNa2HPO41.2 g葡萄糖10.0 gKH2PO40.9 g尿素1.0 gMgSO47H2O0.5 g琼脂15.0 gKCl0.5 g酵母膏0.5 g水解酪素0.5 g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000 mL甲乙注：水解
10、酪素，即水解酪蛋白，由酪蛋白水解得到。(1)从功能上看，甲培养基属于_。从物理性质上看，甲培养基属于_。其中提供氮源的物质是_。(2)如果将乙培养基配制成固体培养基，则在该培养基上长出的菌落是否都能分解纤维素？_。如果培养基中加入_可以筛选出具有分解纤维素能力的菌株，同时透明圈越_(填“大”或“小”)，表示该菌分解纤维素的能力越强。(3)为了计数微生物的数量，图丙采用_法进行接种培养计数，除此之外，还可以采用_法进行计数。其中前一种计数方法所得结果要比后一种计数方法所得结果_(填“大”或“小”)。(4)一位同学利用图丙的方法步骤在4个平板培养基上分别接种0.1 mL土壤稀释液，培养后菌落数分别
11、为180、155、176、129个，则1 mL原土壤样液中微生物数量约为_。解析(4)4个平板中菌落的平均数量为160个，浓度为1 600个/mL，由丙图可知，土壤样液被稀释了125倍，故原始样液中微生物的密度为1 600(个/mL)1252.0105(个/mL)。答案(1)选择培养基固体培养基尿素(2)否刚果红大(3)稀释涂布平板血球计数板计数小(4)2.0105个6.牛奶是微生物培养的良好培养基，牛奶在饮前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物，为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图所示操作。用无菌吸管从锥形瓶中吸取1 mL生牛奶稀释液至盛有9 mL无菌水的试管中，混合均匀，如此再重复2
12、次。请回答下列有关问题：(1)巴氏消毒的方法是_，使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒的好处是_。(2)取最终的牛奶稀释液0.1 mL滴在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是图中的_。(3)图中所示方法为稀释培养法，理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。若用该方法培养设置了3个培养皿，菌落数分别为35个、33个、34个，则可以推测生牛奶中每毫升含细菌数为_个，运用这种方法统计的结果往往较实际值_(填“偏大”或“偏小”)，原因是_。(4)消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用该方法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，则在操作步骤上应做什么改动？_。(5)从生牛奶取样培养得到的菌落中，混有各种杂菌，从中检测出大肠杆菌的方法是在培养基中加入_，菌落具有_特征的可以认定为大肠杆菌。答案(1)7075 煮30分钟(80 煮15分钟)牛奶的营养成分不被破坏(2)B(3)3.4106偏小个别菌落可能是由2个或多个细菌形成的(4)稀释次数减少(5)伊红美蓝(金属光泽的紫)黑色
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