1、微生物的分离和培养微生物的分离和培养 基础过关基础过关 1在微生物的实验室培养中，下列各项操作不需要在无菌条件下进行的是( ) A配制培养基 B倒平板 C接种 D培养 答案 A 解析 配制培养基时不需要无菌操作，因为配制后的培养基需要进行高压蒸汽灭菌。 2下列关于灭菌和消毒的叙述中，不正确的是( ) A灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B消毒和灭菌实质上是相同的 C接种环用灼烧法灭菌 D常用的灭菌方法有加热法、过滤法、紫外线法、化学药品法 答案 B 解析 消毒是指用较为温和的物理学或化学方法杀灭物体上绝大多数微生物的方法，而灭菌 则是指采用强烈的物理学或化学方法使物体内外所有的
2、微生物永远丧失生长和繁殖能力的方 法，二者实质上不同。 3将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入 37 恒温箱的目的是( ) A对比观察培养基有没有被微生物利用 B对比分析培养基上是否生有杂菌 C没必要放入未接种的培养基 D为了下次接种时再使用 答案 B 解析 设计对照实验的目的是为了检测培养基制备是否成功，即是否生有杂菌。 4下列有关倒平板操作错误的是( ) A将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 C将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌面上 D等待平板冷却凝固后需要倒过来放置 答案 C 解析 倒平板时，培养皿的盖不能完全打开。 5在微生物的实验室培养过程中，获得
3、纯净培养物的关键是( ) A将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌 B接种纯种细菌 C在适宜条件下培养 D防止外来杂菌的入侵 答案 D 解析 将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌只是无菌技术的一个方面， 不代表无菌技术的全部，A 项错误；接种纯种细菌是获得纯净培养物的前提，B 项错误；接 种方法和培养条件不能防止杂菌的污染，C 项错误；防止外来杂菌的入侵是获得纯净培养物 的关键，D 项正确。 6在平板划线操作中，错误的是( ) A将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红 B将烧红的接种环在火焰旁边冷却 C接种环在平板上的划线位置是随机的 D在挑取菌种前和接种完毕后均要将
4、试管口通过火焰 答案 C 解析 接种环灼烧及接种前后试管口要通过火焰，其目的是为了防止杂菌污染，将接种环先 冷却再接种可以避免高温烫死菌种，因此 A、B、D 都是正确的；在平板上划线时，要划三 至五条平行线，而不是随机划线，因此 C 项错误。 能力提升能力提升 7 防止杂菌入侵， 获得纯净的培养物， 是研究和应用微生物的前提。 下列叙述错误的是( ) A实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒 B接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌 C在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染 D使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境 答案
5、B 解析 为防止杂菌污染，研究和应用微生物时应进行消毒和灭菌，实验室可以用紫外线或化 学药物进行消毒，接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层即外焰部位 灼烧灭菌，A 项正确，B 项错误；在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要 洗手，以防止被微生物感染，C 项正确；使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免 污染环境，D 项正确。 8下列关于平板划线操作正确的是( ) A使用已灭菌的接种针、培养皿，在操作过程中不再灭菌 B打开含菌种的试管，需通过火焰灭菌，取出菌种后，需马上塞上棉塞 C将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可 D最后将平板倒置，放在培养
6、箱中 答案 D 解析 在平板划线时，已灭过菌的接种针在每次划线后，都必须用灼烧灭菌法灭菌，A 项错 误；盛有菌种的试管在打开或重新塞棉塞前，都需通过火焰灼烧灭菌，B 项错误；接种时用 带有微生物的接种环在平板培养基表面分区划线，不能将沾有菌种的接种环伸入平板内，C 项错误；划线接种后，须将平板倒置放在培养箱中，D 项正确。 9下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是( ) A步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行 B步骤中，待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖 C步骤中，每次划线前后都需对接种环进行灼烧处理 D划线接种结束后，将图平板倒置后放入培养箱中培养 答案 B 解析
7、 培养与纯化大肠杆菌的过程需要在酒精灯的火焰旁进行，故 A 项正确；步骤中倒入 培养基后应立即盖上培养皿的皿盖，故 B 项错误；步骤接种时，每次划线前后都要对接种 环进行灼烧处理，故 C 项正确；划线接种结束后，将平板倒置后放入培养箱培养，防止冷凝 水污染培养基，故 D 项正确。 10接种是微生物培养和微生物选择的必要步骤之一。下列关于接种的叙述中，不正确的是 ( ) A接种通常在酒精灯火焰附近进行 B接种之前要对接种环进行灼烧灭菌 C接种指无菌条件下将微生物接入培养基的操作 D接种时接种环要将培养基的表面划破 答案 D 解析 接种时接种环不能划破培养基的表面，故 D 错误。 11下表是某种微
8、生物培养基的配方表，请据表回答下面的问题： 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 蒸馏水 0.5 g 1 g 0.5 g 1 g 200 mL (1)此培养基的营养成分有五类，其中蛋白胨提供的营养物质是 。 (2)在培养基制备过程中，各种成分溶化后分装前，必须的操作是 。 (3)在农业生产研究上，常需要进行微生物的培养和计数。如图是利用 法进行微 生物接种，把聚集的菌种逐步 分散到培养基的表面。为达到这一目的，操作上 应注意： (至少答两项)。 答案 (1)碳源、氮源、维生素 (2)调节 pH (3)平板划线 稀释 每次划线前要灼烧接种 环；冷却后从上一区划线末端开始划；首尾区不重叠(任选两项) 解
9、析 微生物培养基含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质，培养基制备过程中各种成分 溶化后分装前，必须调节 pH。 12在实验室培养微生物，一方面需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，另一方 面需要确保无处不在的其他微生物无法混入。请回答下列相关问题： (1)培养基能为培养的微生物提供营养。各种培养基的具体配方不同，但一般都含 有 、 、 、 ；另外，培养基还需要满足微生 物生长对 、 、 的要求。 (2)获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。对实验操作的空间、操作者的衣着和手， 需进行清洁和 (填“消毒”或“灭菌”)；对用于微生物培养的器皿、接种 用具和培养基等需进行 (填“消毒”或“
10、灭菌”)。 (3)微生物接种的方法很多，其核心都是要防止杂菌的污染，保证培养物的纯度。微生物接种 最常用的方法是 和 。 答案 (1)水 碳源 氮源 无机盐 pH 特殊营养物质 氧气 (2)消毒 灭菌 (3)平板划 线法 涂布平板法 13请回答与大肠杆菌纯化培养有关的问题： (1)制备培养基： 配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行 ，培养基在接种前要进行 灭菌。 (2)纯化大肠杆菌： 通过接种在琼脂固体培养基的表面进行连续划线操作，将聚集的菌种逐步分散到培养基的 表面，在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这种 方法称为 。 用该方法统计样本菌落数时 (填
11、“是”或“否”)需要设置对照组？为什么？ 。 (3)讨论分析： 纯化大肠杆菌时， (填“可”或“不可”)用加入抗生素的方法防止杂菌感染。 用该方法分离大肠杆菌时，从第二次划线操作起，每次总是要从上一次划线的末端开始划 线，并划线数次，其原因是 。 大肠杆菌与酵母菌的最本质区别是 。 答案 (1)调节 pH 高压蒸汽 (2)平板划线法 是 需要判断培养基是否被污染 (3)不可 线条末端的细菌数量少，最终可得到由单个细菌繁殖而形成的菌落 大肠杆 菌无成形的细胞核 解析 (1)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调节 pH，培养基在接种前要进行 高压蒸汽灭菌。 (2)通过接种在琼脂固体培养基的
12、表面进行连续划线操作，将聚集的菌种逐步分散到培养基 的表面，在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这 种方法称为平板划线法。因需要判断培养基是否被污染，故需要设置对照。 (3)纯化大肠杆菌时， 不可用加入抗生素的方法防止杂菌污染， 抗生素也可以杀死大肠杆菌。 线条末端的细菌数量少，最终可得到由单个细菌繁殖而形成的菌落。大肠杆菌为原核生 物，无成形的细胞核。 真题体验真题体验 14(2015 江苏，19)做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是( ) A高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖 B倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培
13、养基溅到皿盖上 C为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落 D用记号笔标记培养皿中的菌落时，应标记在皿底 答案 D 解析 高压灭菌加热结束时，应切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的指针指向 0 时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品，A 项错误；倒平板时应将培养皿 打开一条稍大于瓶口的缝隙再缓慢倒入培养基，B 项错误；高温的接种环会杀死细菌，应等 接种环冷却后再挑取菌落，C 项错误；培养皿一般倒置放在培养箱中，且用记号笔标记在皿 底便于取出时分类，D 项正确。 15(2014 江苏，30 节选)为了获得 胡萝卜素产品，某小组开展了产 胡萝卜素酵母的筛选 与色素提取实
14、验。请回答下列问题： (1)实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是 ；为了减少灭 菌后器皿被污染，灭菌前应该 。 (2)为了筛选出酵母菌， 培养基中添加了青霉素， 其目的是 。 (3)为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在 3 块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划 线区均未见菌生长，最可能的原因是 。 (4)为增加 胡萝卜素提取量， 在研磨酵母细胞时， 添加石英砂的目的是 ； 研磨时 (填“需要”或“不需要”)添加 CaCO3， 理由是 。 答案 (1)干热灭菌和湿热灭菌(高压蒸汽灭菌) 用牛皮纸(报纸)包扎器皿 (2)抑制细菌(放线 菌)生长 (3)接种环温度过高，菌被杀死 (4)有助于研磨充
15、分 不需要 胡萝卜素较耐酸 解析 (1)培养皿灭菌常用的方法有湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)、干热灭菌等。将培养皿放入灭 菌锅之前通常用牛皮纸或报纸包扎，避免灭菌后的再次污染。 (2)青霉素能抑制细菌和放线菌的生长繁殖，但对酵母菌等真菌不起作用，因此添加青霉素可 筛选出酵母菌。 (3)三块平板中有两块平板长有菌落，说明含有菌株并可在培养基上生长；而其中一块平板未 见菌落，说明接种不成功，可能是接种环灼烧后未冷却或未充分冷却，使菌株因温度过高而 被杀死。 (4)从 胡萝卜素酵母中提取 胡萝卜素，参照叶绿体中色素提取的方法，可添加石英砂，因 为石英砂有助于研磨充分。在提取叶绿体中色素时，CaCO3的作用是中和酸性物质，防止叶 绿素被分解，而 胡萝卜素较耐酸，不易被分解，故在研磨酵母细胞时无需添加 CaCO3。
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