1、第12课时 酵母细胞的固定化,专题4 酶的研究与应用,学习导航 1.阅读教材P49“课题背景”，认识在应用酶的过程中，存在的实际问题及解决办法。 2.通过阅读教材P49“(一)”，了解高果糖浆及生产高果糖浆的固定化酶技术。 3.结合教材P50“(二)”，掌握固定化技术的方法及适合不同固定方法的材料。 4.阅读教材P50“实验操作”，掌握固定化酵母细胞的实验操作过程，达到能够进行实际操作的目的。 重难点击 1.说出固定化酶和固定化细胞的作用和原理。 2.尝试制备固定化酵母细胞，并利用固定化酵母细胞进行酒精发酵。,一、固定化酶和固定化细胞技术,当堂检测,二、实验操作,内容索引,一、固定化酶和固定化
2、细胞技术,基础梳理,1.固定化酶的应用实例生产高果糖浆(1)反应原理：葡萄糖 。 (2)生产过程 将 固定在颗粒状载体上 放入底端装有分布着许多小孔的筛板的 内(酶颗粒不能通过，反应液能通过),果糖,葡萄糖异构酶,反应柱,葡萄糖溶液从反应柱的上端注入 流过反应柱 与固定化葡萄糖异构酶接触，转化成果糖 果糖从反应柱的 流出,下端,2.固定化酶和固定化细胞技术 (1)概念：利用 方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术。 (2)方法及适用范围(3)优点 固定化酶：酶既能与 接触，又能与 分离，可以反复利用。 固定化细胞：与固定化酶技术相比，固定化细胞制备的成本更低，操作更容易。,物理或化学,细胞,物理
3、吸附法,反应物,产物,问题探究,答案 将酶固定在不溶于水的载体上，使酶既能与反应物接触，又能与产物分离；同时，固定在载体上的酶还可以被反复利用。,1.固定化酶和固定化细胞的原理 (1)根据教材“高果糖浆的生产”分析固定化酶依据的原理与其优点分别是什么？,答案 包埋法。包埋法的原理是：将微生物细胞包埋在不溶于水的多孔性载体中。与固定化酶技术相比较，该方法成本更低，操作更容易。,(2)固定化细胞多采用哪种方法？该方法的原理与优点是什么？,答案,答案 可采用固定化细胞技术。因为固定化细胞固定的是活细胞，而细胞中有多种酶，因此可以催化一系列反应。,2.固定化酶和固定化细胞的特点分析 (1)一种酶只能催
4、化一种或一类化学反应，而在实际生产中很多产物的形成都需要通过一系列的酶促反应才能进行，怎样解决这一问题？,答案 固定化细胞中含有多种酶，能催化一系列生化反应，而固定化酶中只含有一种酶，只能催化一种生化反应。,(2)固定化细胞与固定化酶所固定的酶种类有何区别？,答案,答案 不能。因为大分子难以通过细胞膜进入细胞，不能与细胞内的酶接触而发生反应，因此不能用固定化细胞技术，应该用固定化酶技术。,(3)如果反应物是大分子，能否采用固定化细胞技术？为什么？,答案 都需要适宜的温度和pH等影响酶活性的条件，但固定化细胞还需要提供溶解氧和营养物质。,(4)固定化酶和固定化细胞活性的维持需要的条件有何异同？,
5、答案,归纳总结,固定化酶和固定化细胞的两个区别 (1)固定方法的区别 在实际应用中，酶更适用化学结合法和物理吸附法固定，原因是酶分子小，容易被多孔性物质吸附，更适合与化学物质结合，但容易从包埋材料中漏出。 细胞体积大难以吸附或结合，因而多采用包埋法固定。,(2)催化作用的区别 固定化细胞操作更容易，对酶活性的影响更小，可以催化一系列反应，但是，由于大分子物质难以自由通过细胞膜，因此固定化细胞的应用也受到限制。所以，催化的反应物为大分子物质时，最好选用固定化酶技术。,拓展应用,1.下列关于固定化酶和固定化细胞的说法，不正确的是 A.固定化酶和固定化细胞的技术方法包括包埋法、化学结合法和物理吸附法
6、 B.固定化酶更适合采用化学结合法和物理吸附法 C.由于细胞体积大，而酶分子很小，因此细胞多采用物理吸附法固定化 D.反应物是大分子物质应采用固定化酶,解析 由于细胞体积大，酶分子很小，体积大的细胞难以被吸附或结合，而较小的酶容易从包埋材料中漏出。因此，细胞多采用包埋法固定化，酶更适合采用化学结合法和物理吸附法固定化。,答案,解析,答案 酶分子较小，不适合采用包埋法固定化，可采用化学结合法和物理吸附法固定化。,一题多变 果汁的生产需要果胶酶，用酶固定法可以提高果胶酶的利用率(如右图)。图中果胶酶的固定化适合采用哪种方法？,答案,2.如今，固定化酶与固定化细胞技术已经大规模地应用于各个生产领域。
7、 (1)在实际生产中，固定化酶技术能节约成本的原因是_。与固定化酶技术相比，固定化细胞固定的是_。,解析 将酶固定化后，能使酶在催化反应之后与产物分离，可反复使用；将细胞固定化后，即可以将一种细胞内的多种酶同时进行固定。,固定化酶能被反复,利用,答案,解析,多酶系统(或一系列,酶或多种酶),(2)填写下列三种固定化酶的方法：是 ，是 ，是 。,解析 图示将酶相互连接起来，是化学结合法； 将酶吸附在载体表面上，是物理吸附法； 将酶包埋在细微网格里，是包埋法。,化学结合法,物理吸附法,答案,解析,包埋法,(3)制备固定化酵母细胞时，常用的包埋材料是 ，该载体的特点是 。,解析 海藻酸钠不溶于水，容
8、易与发酵液分离，在高温时容易熔化，温度降低时又可以形成多孔性固体颗粒，是包埋酵母菌的好材料。,海藻酸钠,不溶于水、多孔,答案,解析,答案 不适合。因为细胞体积大，难以被吸附或结合。,一题多变 (1)题中图和方法是否适于固定化酵母细胞？为什么？,答案 酶分子很小，容易从包埋材料中漏出。,(2)题中图方法用于固定化酶时有何缺点？,答案,选择固定化酶与固定化细胞的方法 (1)根据固定方法选择 固定化酶技术：由于酶分子较小，可以采用物理吸附法和化学结合法进行固定，它催化的是单一的化学反应。 固定化细胞技术：细胞一般体积较大，适合应用包埋法固定，而且细胞能够产生多种酶，因此固定化细胞可以催化一系列化学反
9、应。,(2)根据反应液中加入物质选择 在固定化酶应用过程中，反应溶液中只需要加入酶的底物。 固定化细胞在应用过程中，要保持细胞的正常生命活动，反应溶液中除需要加入反应的底物外，还应加入满足细胞生命活动所需要的营养物质等。 (3)根据反应的特点选择 固定化酶可以催化的反应物是小分子或大分子。 固定化细胞则只能催化小分子反应物。,二、实验操作,基础梳理,1.制备固定化酵母细胞 (1)固定方法： 。 (2)常用载体：一些不溶于水的 载体，如 、琼脂糖、 、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等。,包埋法,多孔性,明胶,海藻酸钠,(3)实验操作 酵母细胞的_ 配制 的CaCl2溶液 配制海藻酸钠溶液 海藻酸钠溶液与
10、 混合 固定化酵母细胞,活化,物质的量浓度为0.05 mol/L,酵母细胞,2.用固定化酵母细胞发酵 将固定好的酵母细胞(凝胶珠)用 冲洗23次 将150 mL质量分数为10%的 溶液转移到锥形瓶中 加入固定好的酵母细胞(凝胶珠) 置于25 下发酵24 h 观察是否有 产生，闻闻是否有酒味,蒸馏水,葡萄糖,气泡,问题探究,1.实验过程分析 (1)用于固定酵母细胞的载体是什么？载体的浓度越高固定效果越好吗？,答案 海藻酸钠。海藻酸钠浓度过高不易形成凝胶珠；浓度过低形成的凝胶珠内包埋的细胞过少。,答案 海藻酸钠在水中溶解的速度较慢，需要通过加热促进其溶解，用小火或间断加热并不断搅拌的目的是防止加热
11、过程中海藻酸钠焦糊。,(2)配制海藻酸钠时小火或间断加热并不断搅拌的目的是什么？,答案 固定的酵母细胞必须保持活性才能发挥作用，冷却后加入酵母细胞的原因是防止高温杀死酵母细胞。,(3)为什么要等海藻酸钠溶液冷却后才能加入酵母细胞？,答案,2.实验结果分析 (1)若凝胶珠颜色过浅、呈白色，你知道是什么原因造成的吗？,答案 海藻酸钠浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少。,答案 海藻酸钠浓度偏高。,(2)若凝胶珠不呈圆形或椭圆形，你知道是什么原因造成的吗？,答案 如果看到产生很多气泡，同时闻到酒味，则证明实验获得成功。,(3)利用固定的酵母细胞发酵产生酒精时，当观察到哪些现象时，则可以说明实验获得成功？
12、,答案,归纳总结,固定化酵母细胞的三个注意事项 (1)溶化海藻酸钠，应采用小火或间断加热，直到海藻酸钠完全溶化，以防加热过快，导致海藻酸钠焦糊。 (2)制备固定化酵母细胞时，加入酵母细胞的海藻酸钠溶液不能直接“注入”而应缓慢“滴入”CaCl2溶液中，使刚形成的凝胶珠在CaCl2溶液中浸泡一段时间，以便形成稳定的结构。 (3)要控制好海藻酸钠的浓度。如果海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验效果。,拓展应用,3.关于固定化酵母细胞制备过程的叙述，正确的是 A.为使酵母菌活化，应让干酵母与自来水混合并搅拌 B.用小火或间断加热可防止海藻酸钠
13、溶液焦糊 C.向刚溶化好的海藻酸钠溶液中加入已活化的酵母细胞，充分搅拌并混合均匀 D.将与酵母细胞混匀的海藻酸钠溶液倒入CaCl2溶液中，会观察到CaCl2溶液中有球形或椭球形的凝胶珠形成,答案,解析,解析 酵母细胞活化时，应让干酵母与蒸馏水混合并搅拌，A项错误； 配制海藻酸钠溶液时要用小火或间断加热的方法，否则海藻酸钠会发生焦糊，B项正确； 刚溶化的海藻酸钠应冷却后再与酵母细胞混合，否则温度过高会导致酵母细胞死亡，C项错误； 将与酵母细胞混匀的海藻酸钠溶液匀速滴入CaCl2溶液中，D项错误。,4.下面是制备固定化酵母细胞的实验步骤，请回答下列问题： 酵母细胞的活化配制CaCl2溶液配制海藻酸
14、钠溶液海藻酸钠溶液与酵母细胞混合固定化酵母细胞 (1)在 状态下，微生物处于休眠状态。活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复 状态。活化前应选择足够大的容器，因为酵母细胞活化时 。,解析 酵母细胞在缺水的状态下休眠。活化是加入水使酵母细胞恢复到生活状态。酵母细胞活化后体积会增大。,缺水,正常的生活,答案,解析,体积增大,(2)固定化细胞技术一般采用包埋法，而固定化酶常用 和_。,解析 固定化酶常用化学结合法和物理吸附法固定化。,化学结合法,物理,答案,解析,(3)影响实验成败的关键步骤是 。,解析 实验的关键是配制海藻酸钠溶液，得到凝胶珠。,配制海藻酸钠溶液,吸附法,(4)海藻酸钠溶化过程中的
15、注意事项是_。,要用小火或间断加热，避免海藻酸,钠发生焦糊,解析 海藻酸钠溶化过程要小火加热(小火间断加热)并不断搅拌，使海藻酸钠完全溶化，又不会焦糊。,(5)如果海藻酸钠浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞数目 。如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，说明 。,解析 海藻酸钠浓度过低，包埋的酵母细胞就过少；海藻酸钠浓度过高，不易与酵母细胞混合均匀。,过少,海藻酸钠浓度偏高，制作失败,答案,解析,(6)该实验中CaCl2溶液的作用是 。,解析 氯化钙溶液能使海藻酸钠聚沉。,用于海藻酸钠聚沉,答案 酵母细胞的活化、配制CaCl2溶液以及配制海藻酸钠溶液定容时需要使用蒸馏水。,一题多变 (1)固定酵
16、母细胞的过程中三次使用到蒸馏水，请说出是哪三个环节？,答案 明胶、琼脂糖、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等。,(2)本题中固定酵母细胞使用了海藻酸钠，固定化细胞还可以使用哪些固定化材料？,答案,答案 如果酵母细胞没有活化，则仍处于休眠状态；如果溶化好的海藻酸钠溶液没有冷却就加入了酵母细胞，则酵母细胞会被高温杀死。以上两种情况都会导致酒精发酵失败，而最终无酒精产生。,(3)制备好的固定化酵母细胞可以用于酒精发酵，如果酵母细胞没有活化或溶化好的海藻酸钠溶液没有冷却就加入了酵母细胞，则对酒精发酵会产生怎样的影响？,答案,课堂小结,化学结合,物理吸附,活化,CaCl2,海藻酸钠,固定化,发酵,当堂检测,2,3
17、,4,5,1,1.下列属于固定化酶应用特点的是 可以被反复利用 有利于酶与产物分离 能自由出入载体 一种固定化酶只催化一种酶促反应 酶多用包埋法固定化 A. B. C. D.,答案,解析 酶被固定后可与产物分离，故可反复使用，但不能自由出入依附的载体。通常情况下固定化酶种类单一，所以不能催化一系列酶促反应，只催化一种或一类酶促反应。酶分子较小，不适合采用包埋法进行固定化。,解析,2.下列关于使用固定化酶技术生产高果糖浆的说法，正确的是 A.高果糖浆的生产需要使用果糖异构酶 B.在反应柱内的顶端装上分布着许多小孔的筛板，防止异物进入 C.将葡萄糖溶液从反应柱的上端注入，果糖从反应柱下端流出 D.
18、固定化酶技术复杂，成本较高,2,3,4,1,5,答案,解析,2,3,4,1,5,解析 生产高果糖浆时所用的酶应为葡萄糖异构酶，将这种酶固定在一种颗粒状的载体上，再将这些酶颗粒装到一个反应柱内，柱子底端装上分布着许多小孔的筛板。酶颗粒无法通过筛板上的小孔，而反应溶液却可以自由出入。生产过程中，将葡萄糖溶液从反应柱的上端注入，使葡萄糖溶液流过反应柱，与固定化葡萄糖异构酶接触，转化成果糖，从反应柱的下端流出。反应柱能连续使用半年，大大降低了生产成本。,3.下图所示的几种固定方式中属于包埋法的一组是,2,3,4,1,5,答案,解析 为吸附法， 为化学结合法， 为包埋法，包埋于网格中，包埋于微胶囊中。,
19、解析,A. B. C. D.,4.在制备固定化酵母细胞的实验中，CaCl2溶液的作用是 A.用于调节溶液pH B.用于进行离子交换 C.用于胶体聚沉 D.用于为酵母菌提供Ca2,解析 海藻酸钠胶体在CaCl2这种电解质溶液的作用下，发生聚沉，形成凝胶珠，其作用机理是由于盐离子的电荷与胶体微粒电荷相互吸引，形成更大的胶体颗粒，类似于人体红细胞与抗凝集素之间的凝集反应。,2,3,4,1,5,答案,解析,5.如图所示，图甲为人工种子生产过程示意图，图乙为图甲中过程的相关操作。请据图回答问题：,2,3,4,1,5,(1)图甲中，过程、分别称为 、。 (2)图乙中，包埋形成人工种子的过程中， 先适当加热使海藻酸钠溶化，然后将溶 化的海藻酸钠溶液 ，再加入充分搅拌混合均匀。 (3)若用图乙的方法“制备固定化酵母细胞”， 海藻酸钠溶液的浓度对实验结果影响较大，若浓度过高，则 ，通常评价该实验结果主要是观察凝胶珠的 。,2,3,4,1,5,脱分化,再分化,冷却至室温,胚状体,不易形成凝胶珠,颜色和形状,答案,解析,2,3,4,1,5,解析 题图是利用植物组织培养技术生产人工种子及用海藻酸钠包埋人工种子的过程。过程、分别称为脱分化、再分化；海藻酸钠溶液的配制是固定化酵母细胞的关键，如果海藻酸钠溶液浓度过高，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数量较少，都会影响实验效果。,
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