1.2 分离特定的微生物并测定其数量 学案（含答案）

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1、第第 2 课时课时 分离特定的微生物并测定其数量分离特定的微生物并测定其数量 学习导航学习导航 1.认识各种微生物形成的菌落特征。2.学会利用涂布平板法分离、培养微生物， 并能测定其数量。3.掌握利用选择培养基分离特定微生物的方法。 重难点击重难点击 简述分离、培养微生物的方法及数量测定。 一、微生物分离和培养的基本理论一、微生物分离和培养的基本理论 1纯培养物培养 在实验室中利用选择培养基可以筛选和分离某种微生物，然后在高度稀释的条件下，在固体 培养基上培养该微生物形成单个菌落，即由一个微生物(如某种细菌)形成的单个菌落。单个 菌落即为纯培养物，可用于科学研究。 2分离特定的微生物 (1)平

2、板分离法 概念：能将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面，每个孤立的活微生物体经过 生长、繁殖均可形成单个菌落。 分离、培养微生物最常用的培养基是琼脂固体培养基。 类型：平板分离法有多种，如涂布平板法、混合平板法等。 a涂布平板法分离细菌：将待分离的样品进行 10 倍系列稀释，取一定稀释度的样品 0.1 mL 倒入预先制备好的培养基平板中，用无菌玻璃涂布器将样品涂布均匀，恒温培养一段时间， 以获得单个菌落。 b混合平板法分离细菌：将待分离的样品进行 10 倍系列稀释，取一定稀释度的样品 0.1 mL 与熔化冷却至 50 左右的培养基混合均匀， 将混合液倒入无菌培养皿中制成平板， 培养一段

3、 时间，以获得单个菌落。 (2)选择培养分离 概念：科学家针对某种微生物的特性，设计一个特定的环境，使之特别适合这种微生物的 生长，而抑制其他微生物的生长。这种通过选择培养进行微生物纯培养分离的技术称为选择 培养分离。 依据原理：不同的微生物有不同的营养需求或对某种化学物质有不同的敏感性。 举例 a要分离耐高温菌，可在高温条件下进行培养。 b要分离对某种抗生素具有抗性的菌种，可在加有该抗生素(如链霉素或青霉素)的平板上进 行分离。 c在培养基中加入质量分数为 10%的酚，可以抑制细菌和霉菌的生长。 d运用将纤维素作为唯一碳源和能源的培养基，可以有效地分离能分解纤维素的细菌。 e运用无氮培养基(

4、培养基完全不含氮元素)，可选择能固氮的细菌。 f运用只含尿素而不含其他氮元素的培养基，可以选择能分解尿素以获取氮的微生物(能合 成脲酶的微生物可以分解尿素)。 3观察各种微生物形成的菌落 (1)菌落：指单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，形成肉眼可 见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。 (2)菌落特征：不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落一般都具有稳定的特征，如菌落的 大小、形状、边缘特征、隆起程度、颜色等，这些可以作为对微生物进行分类、鉴定的重要 依据。 1如何从众多微生物中分离某种微生物，所利用的原理是什么？ 答案 根据微生物所需营养物质、氧气、pH 不同利用选

5、择培养基选择。 2结合教材完善下图中两种分离和纯化微生物的平板分离法并回答问题： (1)涂布平板法的实质是什么？ 答案 在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养 基表面形成单个菌落。 (2)试比较两种分离和纯化方法 项目 操作 特点 结果 涂布 平板法 取一定稀释度的样品涂布平板 用无菌玻璃涂布器将样品涂布均匀 先制作平板后 加入菌液 细菌菌落通常 仅在平板表面 生长 混合 平板法 取一定稀释度的样品与熔化的培养基混合 将与样品混合后的培养基倒入无菌培养皿 菌液与培养基 混合，共同倒 平板 细菌菌落出现 在平板表面和 内部 3选择培养分离所利用的培养基是什么培

6、养基？它利用的原理是什么？ 答案 选择培养分离所利用的培养基是选择培养基。它利用的原理是不同的微生物有不同的 营养需求或对某种化学物质有不同的敏感性。 4通常以菌落的哪些表观特征来对微生物进行分类、鉴定等？ 答案 菌落的大小、形状、边缘特征、隆起程度、颜色等。 归纳总结 (1)菌落的特征：菌落形态包括菌落的大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透 明程度等。每一种细菌在一定条件下形成固定的菌落特征。这些特征对菌种识别、鉴定有一 定意义。 (2)选择培养基筛选微生物的方法 在培养基中加入某种化学物质。 改变培养基中的营养成分。 改变微生物的培养条件。 (3)平板划线法和涂布平板法的比较 项目 优点

7、 缺点 平板划线法 可以观察菌落特征，对混合菌进行分离 不能计数 涂布平板法 可以计数，可以观察菌落特征 吸收量较少， 较麻烦， 平板不干燥 效果不好，容易蔓延 1下列有关涂布平板法，叙述错误的是( ) A首先将菌液进行一系列的梯度稀释 B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面 C在适宜条件下培养 D结果都可在培养基表面形成单个的菌落 答案 D 解析 涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼 脂固体培养基的表面，在适宜条件下进行培养；用不同稀释度的菌液接种，只有在稀释度足 够高的菌液里， 聚集在一起的微生物被分散成单个细胞， 才能够在培养基表面形

8、成单个菌落， 而不是所有培养基上均可出现单个菌落。 一题多变 (1)移液时需要注意哪些问题？ 答案 移液管也需经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰 12 cm 处，吸管头不要 接触任何其他物体。 (2)如何处理涂布器？ 答案 将涂布器浸在盛有 70%酒精的烧杯中，取出时，让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将 沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。 2 从自然菌样中筛选较理想生产菌种的一般步骤是： 采集菌样富集培养纯种分离性能 测定。 (1)不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再 按一定的方法分离、纯化。培养嗜盐菌的菌样应从 (填“高盐”或“低盐”)环境采

9、集，培养厌氧菌的菌样应从 (填“有氧”或“无氧”)环境采集。 (2)富集培养指创设仅适应于该条件的微生物旺盛生长的特定的环境条件，使待分离微生物在 群落中的数量大大增加，从而达到从自然界中分离到所需的特定微生物目的的微生物培养方 法。对嗜盐菌富集培养的培养基应是 培养基；对含耐高温淀粉酶的微生物富集培养 应选择 的培养基，并在 条件下培养。 (3)实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到杀菌的效果。高温灭菌的原理是高温使微生 物的蛋白质和核酸等物质发生 。 灭菌法是微生物研究和教学中应用最广、 效果最好的湿热灭菌法。 (4)如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种

10、的具体方 法。 获得图 A 效果的接种方法是 ； 获得图 B 效果的接种方法是 。 答案 (1)高盐 无氧 (2)加盐 以淀粉为唯一碳源 高温 (3)变性 高压蒸汽 (4)涂布平 板法 平板划线法 解析 (1)在长期自然选择的作用下，生物与其生活环境相适应，培养嗜盐菌的菌样应从高盐 环境中采集，培养厌氧菌应从无氧环境中采集。(2)对嗜盐菌富集培养的培养基应是加盐培养 基，对含耐高温淀粉酶的微生物富集培养应选择以淀粉为唯一碳源的培养基且在高温条件下 培养。(3)高温能使蛋白质和核酸发生不可逆转的变性，高压蒸汽灭菌法是应用最广、效果最 好的湿热灭菌法。(4)从培养基中菌落分布看，获得图 A 效果用

11、的是涂布平板法，获得图 B 效果用的是平板划线法。 二、以尿素为唯一氮源的土壤微生物的分离、培养与数量测定二、以尿素为唯一氮源的土壤微生物的分离、培养与数量测定 1原理：采用唯一氮源为尿素的选择培养基来培养。分离出能在此培养基中生长、繁殖的微 生物。 2实验流程 采集土壤，制备悬液：制备系列稀释液 选择培养：采用选择培养基培养 接种：涂布平板 培养与观察 计数菌落：选取菌落数为 30300 的一组为样本进行统计 3显微镜直接计数法 (1)原理 此法利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量，但不能区分细菌的 死活。 血球计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的容积为 110.1

12、 mm3的计数室。计 数室的规格有两种，分别是 2516 个小方格或 1625 个小方格。但两种规格的计数室都是 由 400 个小格组成的。具体如下图： (2)操作 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，用无菌的毛细滴管吸取摇匀的土壤微生物培养液， 在盖玻片的边缘滴一小滴，让培养液沿着缝隙通过毛细渗透作用自动进入计数室。 加样后静置 5 min，然后将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在 位置，再换成高倍镜进行观察和计数。 (3)计数 若规格为 1625 型的血球计数板，则在计数室内选 4 个中方格(如图中加黑点的左上、右 上、左下、右下四个角)中的菌体进行计数。 若使用规格为

13、2516 型的血球计数板，则在计数室内选 5 个中方格(四个角和中央的方格) 中的菌体进行计数。 对位于格线上的菌体，一般只统计上方和右边格线上(包括这两条格线交叉位置上)的菌体。 求出每个小格所含菌体的平均数，再按下面公式求出每毫升样品中所含的菌体数。计算公 式如下： 每 mL 原液所含菌体数每小格平均菌体数400104稀释倍数。 (4)使用完毕后，将血球计数板用水反复冲洗干净，切勿用硬物洗刷。洗完后自然晾干即可。 1筛选分解尿素的细菌的选择培养基 下面是筛选分解尿素的细菌使用的培养基的配方，请分析： KH2PO4 1.4 g Na2HPO4 2.1 g MgSO4 7H2O 0.2 g 葡

14、萄糖 10.0 g 尿素 1.0 g 琼脂 15.0 g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到 1 000 mL (1)在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 答案 碳源是葡萄糖，氮源是尿素。 (2)分离分解尿素的细菌的选择培养基是如何进行选择的？ 答案 该选择培养基的配方中，尿素是培养基中的唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微 生物才能够生长。 (3)为什么只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长？ 答案 分解尿素的微生物能合成脲酶，而脲酶可将尿素分解成氨，从而为微生物生长提供氮 源。 2 下面是土壤中尿素分解菌的分离与计数的实验流程示意图， 请结合教材提供的资料分析

15、回 答下列问题： (1)试写出分离土壤中分解尿素的细菌的实验流程。 答案 土壤取样样品稀释取样涂布微生物培养观察并记录结果细菌计数。 (2)统计菌落数目 甲、乙两位同学用涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为 106的培养 基中，得到以下两种统计结果。 甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为 230，该同学的统计结果是否真实可 靠？为什么？ 答案 不真实。为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下至少涂布 3 个平板，统计结果后计算平均值。 乙同学在该浓度下涂布了 3 个平板，统计的菌落数分别为 21、212、256，该同学将 21 舍 去，然后取平均值

16、。该同学对实验结果的处理是否合理？为什么？ 答案 不合理。微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果不一致的情况，应分析实验 过程中可能的影响因素，找出差异的原因，而不能简单地舍弃后进行计数。 某同学在三种稀释度下吸取 0.1 mL 的菌液涂布平板，统计菌落数，得到以下的数据，试计 算 1 g 样品的活菌数。 平板 稀释度 平板 1 平板 2 平板 3 104 320 360 356 105 212 234 287 106 21 23 18 答案 105的稀释度下取 0.1 mL 涂布的三个平板上的菌落数在 30300 之间，计算其平均值 为(212234287)/3244。 进一步可以换算出

17、 1 g 样品中活菌数为(244 0.1)1052.44108。 为什么统计的菌落数比活菌的实际数目低？ 答案 当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 归纳总结 分离尿素分解菌操作中的注意事项 (1)在实验操作中，每个步骤都要注意无菌操作，以防培养基被污染，影响实验效果。 (2)样品稀释液的最佳浓度为每个平板上获得 30300 个菌落时的浓度， 细菌一般选 104、 105、 106倍稀释液进行培养，放线菌一般选 103、104、105倍稀释液，真菌一般选 102、103、104 倍稀释液。 (3)为排除非测试因素(培养基)的干扰，实验需设置牛肉膏蛋白胨培养基进行空白对照。

18、(4)每一稀释倍数的菌液都至少要涂布 3 个平板，作为重复实验，求其平均值，若其中有菌落 数与其他平板悬殊过大的，需要对该平板重新制作。 3下列有关微生物筛选的叙述中，不正确的是( ) A用全营养牛肉膏蛋白胨培养基筛选大肠杆菌 B用高 NaCl 的培养基筛选抗盐突变菌株 C含酚红的尿素培养基筛选鉴别出分解尿素的菌株 D利用高温条件筛选耐热的 Taq 细菌 答案 A 解析 全营养牛肉膏蛋白胨培养基常用于大肠杆菌的培养，该培养基对微生物无选择作用， A 项错误；抗盐突变菌株具有耐高盐的能力，因此可以利用高 NaCl 的选择培养基进行选择 培养，B 项正确；分解尿素的菌株会分解尿素形成氨，使培养基

19、pH 升高，因此可以利用含 酚红的尿素培养基筛选鉴别出分解尿素的菌株， C 项正确； 利用高温条件可以筛选耐热的 Taq 细菌，D 项正确。 4自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后 进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答下列有关问题： (1)实验步骤 制备稀释倍数为 102、103、104、105、106的系列稀释液。 为了得到更加准确的结果，应选用 法接种样品。 适宜温度下培养。 (2)结果分析 测定大肠杆菌数目时，在对应稀释倍数为 106的培养基中，得到以下几种统计结果，与事 实更加接近的是 。 A一个平板，统计的菌落数是 23

20、0 B两个平板，统计的菌落数是 220 和 260，取平均值 240 C三个平板，统计的菌落数分别是 400、212 和 256，取平均值 289 D四个平板，统计的菌落数分别是 210、260、240 和 250，取平均值 240 一同学在稀释倍数为 106的培养基上测得平板上菌落数的平均值为 212， 那么每毫升样品中 的菌落数约是(涂布平板时所用的稀释液体积为 0.2 mL) 。 用这种方法测定菌体密度时，实际活菌数量要比测得的数量 (填“多”或 “少”)，因为 。 答案 (1)涂布平板 (2)D 1.06109个 多 当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 解析 (1)

21、若对大肠杆菌进行计数，则需要用涂布平板法接种样品。(2)应选取多个菌落数相 差不大的平板进行计数，取其平均值。212 0.21061.06109(个)。因为一个菌落可能 由两个或多个细菌连在一起生长而成，所以实际活菌数量要比测得的数量多。 一题多变 (1)如果某同学的稀释倍数仅为 104，则测定的数值要比题中测定的数值高还是低？为什么？ 答案 低。因为稀释倍数太低，则大部分菌落是由多个细菌繁殖而成的，所以测定的菌落的 数值要偏低。 (2)第(2)问第小题 C 项中菌落数为 400 的平板不符合要求， 试分析该平板中菌落数目多于其 他平板的可能的原因。 答案 a培养基被污染，一些菌落是由杂菌繁殖

22、而成的；b.接种过程中由于操作不当感染了 杂菌；c.取菌液时没有振荡摇匀，导致所取菌液中细菌个体浓度偏大等。 方法链接 用涂布平板法计数微生物的注意事项 (1)涂布平板操作要求： 按照平行重复的原则， 每一稀释度的菌液涂布 3 个或 3个以上的平板。 (2)计数的时机：当各平板上菌落数目稳定时进行计数。 (3)选择可用于计数的平板： 选择菌落数在 30300 之间的平板(相同稀释度的平板均符合该特 点)进行计数，然后取平均值。 三、分离土壤中能分解纤维素的微生物三、分离土壤中能分解纤维素的微生物 1原理 (1)土壤中能分解纤维素的微生物，都能分泌纤维素酶，将纤维素分解成小分子糖类物质以满 足自

23、身生命活动的需要。 (2)培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。 2纤维素分解菌的鉴定：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来说明菌落是否是由能分解 纤维素的细菌形成的。其原理是： 纤维素分解菌 刚果红 纤维素 红色复合物 纤维素酶红色消失，出现透明圈 1鉴别纤维素分解菌的培养基 (1)鉴别纤维素分解菌时需在培养基中添加什么物质？ 答案 刚果红染色剂。 (2)鉴别培养基和选择培养基在目的和物理性质方面的区别是什么？ 答案 鉴别培养基是在培养基中加入某些特定的作用底物和指示剂，观察微生物生长过程 中分解底物所释放的不同产物，通过指示剂的反应不同来鉴别微生物；选择培养基是在培养 基中加入某些物质，

24、以促进目的菌的生长繁殖，同时抑制其他杂菌的生长繁殖。 选择培养的培养基中没有加入琼脂，所以属于液体培养基，而鉴别培养基一般为固体培养 基。 2透明圈的形成 (1)对分离的纤维素分解菌作进一步的鉴定的原因是什么？ 答案 产生透明圈的菌落可能是能产生纤维素酶的微生物，也可能是能降解刚果红的菌种， 所以需要进一步鉴定。 (2)简要概述筛选纤维素分解菌时透明圈是如何形成的。 答案 纤维素分解菌分解纤维素产生的纤维二糖和葡萄糖，不能与刚果红形成红色复合物， 而出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。 (3)向含有分解尿素的细菌的培养基中加入酚红指示剂，会出现类似的圈吗？ 答案 分解尿素的细菌能够将尿素分解成氨

25、，加入酚红指示剂后会变红，也会形成以尿素分 解菌为中心的红色的圈。 5分析下表培养基的配方，请回答下面的问题： 纤维素分解菌的选择培养基 组分 含量 纤维素粉 5 g NaNO3 1 g Na2HPO4 7H2O 1.2 g KH2PO4 0.9 g MgSO4 7H2O 0.5 g KCl 0.5 g 酵母膏 0.5 g 水解酪素 0.5 g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到 1 000 mL。 (1)此培养基配方中为微生物提供碳源的主要是 、氮源是 。 (2)此配方为 培养基(根据物理状态)配方。 (3)此培养基选择出的微生物主要是 。 问题导析 (1)该培养基中纤维素是主要的碳源，所以可

26、以用于筛选纤维素分解菌。 (2)由于该培养基中没有加入琼脂，所以为液体培养基。该培养基中微生物与营养成分的接触 更充分，可以提高微生物的代谢效率。 答案 (1)纤维素粉 NaNO3、酵母膏、水解酪素 (2)液体 (3)纤维素分解菌 解析 该培养基的主要碳源是纤维素粉，氮源有 NaNO3、酵母膏、水解酪素。因没有凝固剂 成分，因此，该培养基从物理状态上看属于液体培养基。因该培养基仅以纤维素粉为主要碳 源，因此，可用于选择培养纤维素分解菌。 一题多变 (1)从土壤中分离纤维素分解菌时，哪种情况下可以省略选择培养？ 答案 当土壤中纤维素分解菌的浓度很高时，可以省略选择培养这一步骤。 (2)本题中的培

27、养基配方中的酵母膏可以为微生物提供什么成分？ 答案 可以提供碳源、氮源和生长因子。 (3)该培养基中纤维素是否为唯一的碳源？ 答案 不是，纤维素是主要的碳源，另外，酵母膏和水解酪素也可以提供少量的碳源。 6下列有关刚果红染色法的叙述，不正确的是( ) A刚果红可以在细菌菌落形成前倒平板时加入 B刚果红可以在菌落形成后加入 C刚果红在菌落形成前倒平板时加入，加入的刚果红不需要灭菌 D在菌落形成后加入刚果红时，刚果红不需要灭菌 答案 C 解析 刚果红可以在细菌菌落形成前倒平板时加入，也可以在菌落形成后加入，若在细菌菌 落形成前倒平板时加入刚果红，则所加刚果红要进行灭菌，以防杂菌的侵入，影响纤维素分

28、 解菌菌落的形成；若在菌落形成后加入刚果红，则不需要灭菌。 易错易混 关于纤维素分解菌筛选的三个易错警示 (1)纤维素分解菌的选择培养基中的碳源并不只有纤维素，其中酵母膏和水解酪素也可起碳源 的作用。 (2)在纤维素分解菌的选择培养基中生长的不只有纤维素分解菌。因此，选择培养后要进行鉴 别培养，才能获得纤维素分解菌。 (3)出现透明圈的菌落也不一定是纤维素分解菌。 1菌种鉴定的重要依据是( ) A细菌的大小、形状和颜色 B菌落的大小、形状和颜色 C有无鞭毛 D培养基的不同 答案 B 解析 不同种类的微生物所形成的菌落在大小、形状、边缘特征、隆起程度、颜色等方面具 有一定的差异。所以，在一定条件

29、下所形成的菌落，可以作为微生物鉴定的重要依据。单个 的细菌用肉眼是看不见的，故细菌的个体特征不能作为菌种鉴定的依据。 2用涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在加入 10 5 g/mL 土壤悬液的培养基中，得 到以下几种统计结果，正确的是( ) A涂布了一个平板，统计的菌落数是 230 B涂布了两个平板，统计的菌落数是 215 和 260，取平均值 238 C涂布了三个平板，统计的菌落数分别是 21、212 和 256，取平均值 163 D涂布了三个平板，统计的菌落数分别是 210、240 和 250，取平均值 233 答案 D 解析 在设计实验时，一定要涂布至少 3 个平板，作为重复组，才

30、能增强实验结果的说服力 与准确性。C 项虽涂布了三个平板，但是，其中一个平板的计数结果与另两个相差太远，说 明在操作过程中可能出现了错误。因此，不能简单地将三个平板的计数值用来求平均值。 3根据生物与环境的相互依存关系，下列寻找目的菌株的思路不正确的是( ) A从热泉中寻找耐热菌 B从成熟的葡萄皮上寻找酵母菌 C从贫瘠的土壤中寻找分解尿素的细菌 D从树林的腐殖土中寻找分解纤维素的细菌 答案 C 解析 贫瘠的土壤中尿素含量少，应从富含尿素的环境中寻找分解尿素的细菌。 4尿素是一种重要的农业肥料，但若不经过细菌分解，就不能更好地被植物利用。生活在土 壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中

31、的微生物对尿素是否有分解作用，设 计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如表所示，实验 步骤如图所示。请分析回答下列问题： 琼脂 15 g 尿素 1 g 葡萄糖 10 g MgSO4 7H2O 0.2 g Na2HPO4 2.1 g KH2PO4 1.4 g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到 1 000 mL (1)培养基中加入尿素的目的是筛选 ，这种培养基属于 培养基。 (2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的 和 ， 实验需要振荡培养， 目的是 。 (3)转为固体培养基时，常采用 的方法接种，获得单菌落后继续筛选。 (4)下列材料或用具：培养细菌用的培养基与培养皿；玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管； 实验操作者的双手。 其中需要灭菌的是 ； 需要消毒的是 (填序号)。 答案 (1)目的菌(分解尿素的细菌) 选择 (2)尿素 葡萄糖 为目的菌提供氧气 (3)涂布平板(平板划线) (4)和 解析 (1)培养基中加入尿素的目的是筛选能分解尿素的细菌。 (2)尿素可为能分解尿素的细菌 提供氮源，振荡可为目的菌株提供氧气。(3)在固体培养基中接种常用涂布平板法和平板划线 法。(4)操作器械需灭菌，操作者双手需消毒。